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高效液相色谱仪选择缓冲盐的注意事项
2019-06-10 10:52
高效液相色谱仪选择缓冲盐的注意事项



高效液相色谱仪中选择缓冲盐的注意事项,在高效液相色谱法中,分离酸或碱缓冲溶液对维持流动相恒定pH和提高保留时间的重现性都非常重要。
 
一、怎么选择缓冲液:
Pka和缓冲容量
溶解度
紫外吸光度(使用UV检测器)
挥发性(MS蒸发光散射检测器)
离子对性质
稳定性和仪器的兼容性
根据以上的理论,流动相缓冲容量取决于缓冲盐的pka,缓冲盐浓度,流动相pH。
 
二、当缓冲液中溶质的的两种形态(HA和 A-)浓度相等时
即缓冲盐的pka与流动相pH相等时,缓冲能力最大。当流动相的pH与缓冲盐的pka相差越大,缓冲盐的缓冲容量就越小。因此缓冲的pka与流动相的pH相差不能超过±1.0个单位。
高效液相色谱仪流动相的缓冲容量一般与缓冲液浓度成正比关系,通常浓度范围为5~25mmol/l。
样品溶解在流动相中可以避免在反相色谱过程中发生缓冲能力的问题,尤其是流动相缓冲液浓度较低或注入样品量较大的时候尤为重要。
 
三、当缓冲容量偏低时,可以从以下方面调节缓冲容量:
1、减少缓冲液pKa与流动相pH之间的差异(可调节pH或更换缓冲液)
2、矿大流动相pH和溶质pKa之间的差异(当差异足够大时,溶质倍完全离子化或者保持非离子化形式此时缓冲液显的不重要了)
3、增加缓冲液浓度
4、减少样品进样体积
5、调节样品的pH与流动相的一致。
 
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